造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞,又称多功能干细胞。造血干细胞一般以其表面膜蛋白(如CD38,CD40等)作为marker进行流式分选获得,为了区分不同亚型的造血干细胞、实现精细化分群,需要进一步以其膜内溶酶体蛋白作为marker来进行亚型的分选。为了实现膜内溶酶体蛋白的抗体染色,需要对细胞进行破膜处理才能让染料进入实现膜内蛋白染色;而细胞经过固定破膜处理之后会失去活性,无法进一步开展功能实验。因此本研究目的在于能够获得与已知溶酶体marker高度符合的细胞表面特异性膜蛋白来替代溶酶体蛋白marker,在不进行破膜处理影响细胞活性的同时实现造血干细胞的分离,为HSC亚型区分的功能实验和深入机制研究奠定基础。
通过膜蛋白marker分选得到的造血干细胞数量可以达到上万个,而通过膜内溶酶体marker进一步细分不同的造血干细胞类型,单一类型的造血干细胞数量往往只有几百个,因此无法采用常规的蛋白质组学样本处理方案进行分析。贝普奥生物(BayOmics)核心技术之一SISPROT是一种基于固相萃取小柱的集成式蛋白质组学前处理技术,该技术兼具高灵敏度、高通量及高稳定性的特点,尤其适用于低微克甚至纳克级别的蛋白质样本。
本研究采用SISPROT® PAC超微量样本前处理方案从低至500个细胞以及低至10 ng蛋白起始量的造血干细胞样本中,稳定获得了3000+种蛋白,其中20%以上为膜蛋白。本研究结果表明采用SISPROT® PAC 超微量样本前处理方案为微量造血干细胞样本研究提供了高深度蛋白质组学检测,为造血干细胞的类型分离及功能研究提供了重要的数据支持。
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深圳市贝普奥生物科技有限公司是一家于2022年1月在深圳成立的蛋白质组学研发型高科技公司。作为蛋白质组学上游市场解决方案提供商,公司致力于对蛋白质组学领域的研发成果进行商业开发及转化。团队以受多项专利保护的蛋白质组学前处理系列产品为切入点,通过临床功能蛋白质组学技术平台为目标市场提供全流程解决方案。
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